Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（適用于多肽電泳） 說明書Ver
740056
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貨號
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名稱
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規格
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RTD6122
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Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒
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25次
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● 產品組成：
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序號
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組分貨號
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名稱
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規格
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貯存
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1
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RTD6122-01
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2×濃縮膠緩沖液
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20
ml
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4℃
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2
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RTD6122-02
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2×分離膠緩沖液
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65
ml
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4℃
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3
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RTD6122-03
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2×濃縮膠聚合溶液
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20
ml
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4℃
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4
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RTD6122-04
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2×分離膠聚合溶液
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65
ml
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4℃
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5
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AP020P
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10% APS（干粉）
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5 ml
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常溫
配制后-20℃
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6
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TA0761-01
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TEMED
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0.5
ml
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常溫
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7
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CB010P
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10×Tris-Tricine-SDS緩沖液
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500
ml(干粉)
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常溫
配制后4℃
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8
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TP050-01
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2×Tricine上樣緩沖液(變性,還原)
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1
ml
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-20℃
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● 產品簡介：
該產品含有多肽電泳全套試劑，可以用來檢測2.5-20
kD的多肽大小。本試劑盒可配制至少25塊常規大小（8×10cm）,厚度1 mm的PAGE膠。該產品具有以下特點：
1 分辨率高：凝膠緩沖液獨特配方，可以有效分離2.5-5 kD多肽；
2 使用方便：配制凝膠時只需1:1混合濃縮膠或分離膠溶液，不用計算；
3 易于上樣：紅色濃縮膠，易于觀察加樣孔，上樣方便。
● 貯存、運輸及效期：
按照標簽溫度貯存；常溫運輸；有效期一年。
● 使用說明：
一. 10%APS溶液配制：
10%
APS為固體粉末，使用前加入5 ml雙蒸水溶解即配制成10% APS溶液，將溶液分裝后置于-20℃保存，通常一年內有效。該溶液在4℃條件下可以穩定保存兩周。若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換使用-20℃保存的10% APS溶液。
二. 制膠：
1. 配制分離膠:
1.1按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。 表1
（一塊1 mmmini膠用量）*
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分離膠
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濃縮膠
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18％T
/5 ml
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5％T
/1.5 ml
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2×濃縮膠緩沖液
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/
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0.75 ml
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2×分離膠緩沖液
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2.5 ml
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/
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2×濃縮膠用聚合溶液
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/
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0.75 ml
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2×分離膠用聚合溶液
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2.5 ml
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/
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10%APS溶液
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~50 μl
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~15 μl
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TEMED
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~5 μl
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1.5 μl
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注： * 如非必須，不要使用厚度1.5 mm的凝膠，盡量使用厚度1 mm的凝膠，這樣會減少電泳后染色和脫色的時間。
1.2 在玻璃板中迅速灌入適量分離膠溶液，使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長0.5
cm即可。注：此溶液為過量，請勿全部注入。
1.3
然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇層，使凝膠表面保持平整。
1.4 靜置10-30分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長?？梢愿鶕?的標準條件調節促凝劑的加入量。分離膠25℃條件下，約20分鐘可以聚合。
2. 配制濃縮膠:
去除覆蓋在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留的乙醇吸去。
2.1 按照表一將不同成分加入到小燒杯中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
2.2 將梳子插入凝膠內，避免產生氣泡。
2.3 靜置30-50分鐘待凝膠聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長?？梢愿鶕?的標準條件調節促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件下，約40分鐘可以聚合。
三. 電泳：
3.1 變性電泳緩沖液和樣品配制：
3.1.1 10×Tris-Tricine-
SDS緩沖液配制：
將10×Tris-Tricine -SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干凈的燒杯中，加入500 ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。超純水稀釋10倍配成1×Tris-Tricine
-SDS緩沖液。
注：伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TTS緩沖液。
3.1.2 變性樣品處理：
待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液（變性，還原）[Cat No：TP050]等體積混合，95℃處理5分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經含有上樣緩沖液，根據說明書上樣（預染Marker不能加熱處理，非預染Marker上樣前一般要95℃處理5分鐘）。
3.2 非變性電泳緩沖液配制和樣品配制：
3.2.1 10×Tris-Tricine緩沖液配制：
將10×Tris-Tricine緩沖液（10×TT）粉末[Cat No:CB020P]（試劑盒不提供）置于一干凈的燒杯中，加入500 ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500 ml 10×TT緩沖液。超純水稀釋10倍配成1×Tris-Tricine緩沖液。
注：伯樂Mini
III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TT緩沖液。
3.2.2 非變性樣品處理：
待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液（非變性，非還原）[Cat No:TP070]
（試劑盒不提供）等體積混合，不要加熱，直接上樣。
3.3 電泳：
將電泳槽的內槽加滿電泳緩沖液，輕柔拔出梳子，用1 ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品加入點樣孔，穩壓電泳（表2），至藍色考馬斯亮藍指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。
表2 多肽電泳條件
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恒電壓
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150 V
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起始電流
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60-75
mA/板膠
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結束電流
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15-25
mA/板膠
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電泳時間
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2.5-3小時
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注：穩壓電泳，電流不用調節，記錄電流數值在推薦范圍內，電泳過程中電流會逐漸降低。
四. 染色：
凝膠可以使用常規考馬斯亮藍染色液和脫色液進行染色和觀察。需要注意的是，常規染色和脫色方法需要較長時間，小肽由于長度較短，和凝膠結合不緊密，長時間在溶液中浸泡容易從凝膠中脫離。常規染色和脫色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），該產品除具有染色快，無毒，靈敏性高等特點外，還能對小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規染色液的理想替代品。
實驗示例：
多肽電泳配套試劑